ⅠNयूक्लिक एसिडiपरिचय
न्यूक्लिक एसिड को डीऑक्सीराइबोन्यूक्लिक एसिड (डीएनए) और राइबोन्यूक्लिक एसिड (आरएनए) में विभाजित किया गया है, जिनमें से आरएनए को इसके विभिन्न कार्यों के अनुसार राइबोसोमल आरएनए (आरआरएनए), मैसेंजर आरएनए (एमआरएनए) और ट्रांसफर आरएनए (टीआरएनए) में विभाजित किया गया है।डीएनए मुख्य रूप से नाभिक, माइटोकॉन्ड्रिया और क्लोरोफॉर्म में केंद्रित होता है, जबकि आरएनए मुख्य रूप से साइटोप्लाज्म में वितरित होता है।जीन अभिव्यक्ति के भौतिक आधार के रूप में, न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण आणविक जीव विज्ञान अनुसंधान और नैदानिक आणविक निदान में एक अत्यंत महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है।न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण की एकाग्रता और शुद्धता सीधे बाद के पीसीआर, अनुक्रमण, वेक्टर निर्माण, एंजाइम पाचन और अन्य प्रयोगों को प्रभावित करेगी।
Ⅱ न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण और शुद्धिकरण विधि
①फिनोल/क्लोरोफॉर्म निष्कर्षण विधि
फिनोल/क्लोरोफॉर्म निष्कर्षण डीएनए निष्कर्षण के लिए एक शास्त्रीय विधि है, जो नमूनों के उपचार के लिए मुख्य रूप से दो अलग-अलग कार्बनिक सॉल्वैंट्स का उपयोग करता है, जल चरण में डीएनए आधारित न्यूक्लिक एसिड, कार्बनिक चरण में लिपिड और दो चरणों के बीच प्रोटीन को भंग करता है।इस विधि में कम लागत, उच्च शुद्धता और अच्छे प्रभाव के फायदे हैं।नुकसान जटिल संचालन और लंबा समय है।
② ट्राइज़ोल विधि
ट्राइज़ोल विधि आरएनए निष्कर्षण के लिए एक शास्त्रीय विधि है।ट्राइज़ोल विधि को क्लोरोफॉर्म के साथ सेंट्रीफ्यूजेशन के बाद जलीय चरण और कार्बनिक चरण में विभाजित किया गया है, जिसमें आरएनए को जलीय चरण में भंग कर दिया जाता है, जलीय चरण को एक नई ईपी ट्यूब में स्थानांतरित किया जाता है, आइसोप्रोपेनॉल जोड़ने के बाद वर्षा प्राप्त की जाती है, और फिर इथेनॉल शुद्धिकरण होता है।यह विधि जानवरों के ऊतकों, कोशिकाओं और बैक्टीरिया से आरएनए निष्कर्षण के लिए उपयुक्त है।
③ केन्द्रापसारक स्तंभ शुद्धि विधि
अपकेंद्रित्र स्तंभ शुद्धि विधि विशेष रूप से विशेष सिलिकॉन मैट्रिक्स सोखना सामग्री के माध्यम से डीएनए को सोख सकती है, जबकि आरएनए और प्रोटीन आसानी से गुजर सकते हैं, और फिर न्यूक्लिक एसिड को संयोजित करने के लिए उच्च नमक कम पीएच का उपयोग करते हैं, न्यूक्लिक एसिड को अलग करने और शुद्ध करने के लिए कम नमक उच्च पीएच मान क्षालन का उपयोग करते हैं।फायदे उच्च शुद्धिकरण एकाग्रता, उच्च स्थिरता, कार्बनिक विलायक की कोई आवश्यकता नहीं और कम लागत हैं।नुकसान यह है कि इसे चरण दर चरण सेंट्रीफ्यूज करने की आवश्यकता होती है, और अधिक ऑपरेशन चरणों की आवश्यकता होती है।
④ चुंबकीय मोती विधि
चुंबकीय मोतियों की विधि में कोशिका ऊतक के नमूने को लाइसेट के माध्यम से विभाजित करना, नमूने में न्यूक्लिक एसिड को छोड़ना होता है, और फिर न्यूक्लिक एसिड अणुओं को विशेष रूप से चुंबकीय मनका की सतह पर सोख लिया जाता है, जबकि प्रोटीन और शर्करा जैसी अशुद्धियाँ छोड़ दी जाती हैं। तरल.कोशिका ऊतक विभाजन, न्यूक्लिक एसिड के साथ चुंबकीय मनका बंधन, न्यूक्लिक एसिड धुलाई, न्यूक्लिक एसिड क्षालन, आदि के चरणों के माध्यम से, अंततः शुद्ध न्यूक्लिक एसिड प्राप्त होता है।स्टेप सेंट्रीफ्यूजेशन की आवश्यकता के बिना, इसके फायदे सरल ऑपरेशन और कम समय में उपयोग हैं।इसकी तकनीकी आवश्यकताएं कम हैं और यह स्वचालित और बड़े पैमाने पर संचालन का एहसास कर सकता है।चुंबकीय मनका और न्यूक्लिक एसिड का विशिष्ट संयोजन निकाले गए न्यूक्लिक एसिड को उच्च सांद्रता और शुद्धता वाला बनाता है।नुकसान यह है कि मौजूदा बाजार मूल्य अपेक्षाकृत महंगा है।
⑤ अन्य तरीके
उपरोक्त चार विधियों के अलावा, उबलना क्रैकिंग, केंद्रित नमक विधि, आयनिक डिटर्जेंट विधि, अल्ट्रासोनिक विधि और एंजाइमैटिक विधि आदि भी हैं।
Ⅲ न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण का प्रकार
फोरेजीन के पास दुनिया का अग्रणी डायरेक्ट पीसीआर प्लेटफॉर्म, डबल-कॉलम आरएनए आइसोलेशन प्लेटफॉर्म (केवल डीएनए + केवल आरएनए) है।मुख्य उत्पादों में डीएनए/आरएनए आइसोलेशन किट, पीसीआर और डायरेक्ट पीसीआर अभिकर्मक आणविक प्रयोगशाला अभिकर्मक श्रृंखला शामिल हैं।
① कुल आरएनए निष्कर्षण
कुल आरएनए निष्कर्षण नमूनों में रक्त, कोशिकाएं, पशु ऊतक, पौधे, वायरस आदि शामिल हैं। कुल आरएनए निष्कर्षण के माध्यम से कुल आरएनए की उच्च शुद्धता और उच्च सांद्रता प्राप्त की जा सकती है, जिसका उपयोग आरटी-पीसीआर, चिप विश्लेषण, इन विट्रो अनुवाद में किया जा सकता है। आणविक क्लोनिंग, डॉट ब्लॉट और अन्य प्रयोग।
फोरजीन संबंधीआरएनए अलगाव किट
पशु कुल आरएनए अलगाव किट--विभिन्न जानवरों के ऊतकों से उच्च शुद्धता और उच्च गुणवत्ता वाले कुल आरएनए को जल्दी और कुशलता से निकालें।
सेल टोटल आरएनए आइसोलेशन किट--अत्यधिक शुद्ध और उच्च गुणवत्ता वाला कुल आरएनए 11 मिनट में विभिन्न सुसंस्कृत कोशिकाओं से प्राप्त किया जा सकता है।
प्लांट टोटल आरएनए आइसोलेशन किट--कम पॉलीसेकेराइड और पॉलीफेनॉल सामग्री वाले पौधों के नमूनों से उच्च गुणवत्ता वाले कुल आरएनए को तुरंत निकालें।
वायरल आरएनए आइसोलेशन किट-प्लाज्मा, सीरम, सेल-मुक्त शरीर के तरल पदार्थ और सेल कल्चर सुपरनैटेंट्स जैसे नमूनों से वायरल आरएनए को तेजी से अलग और शुद्ध करें।
② जीनोमिक डीएनए निष्कर्षण
जीनोमिक डीएनए निष्कर्षण नमूनों में मिट्टी, मल, रक्त, कोशिकाएं, पशु ऊतक, पौधे, वायरस आदि शामिल हैं। जीनोमिक डीएनए निष्कर्षण का उपयोग एंजाइम पाचन, डीएनए लाइब्रेरी निर्माण, पीसीआर, एंटीबॉडी तैयारी, पश्चिमी धब्बा संकरण विश्लेषण, जीन चिप, उच्च में किया जा सकता है। -थ्रूपुट अनुक्रमण और अन्य प्रयोग।
फोरजीन संबंधीडीएनए अलगाव किट
पशु ऊतक डीएनए अलगाव किट- जानवरों के ऊतकों, कोशिकाओं आदि जैसे कई स्रोतों से जीनोमिक डीएनए का तेजी से निष्कर्षण और शुद्धिकरण।
ब्लड डीएनए मिडी किट (1-5 मिली)--एंटीकोआग्युलेटेड रक्त (1-5 मिली) से उच्च गुणवत्ता वाले जीनोमिक डीएनए को तुरंत शुद्ध करें।
बुक्कल स्वैब/एफटीए कार्ड डीएनए आइसोलेशन किट--बक्कल स्वाब/एफटीए कार्ड नमूनों से उच्च गुणवत्ता वाले जीनोमिक डीएनए को तुरंत शुद्ध करें।
प्लांट डीएनए आइसोलेशन किट- पौधों के नमूनों (पॉलीसेकेराइड और पॉलीफेनोल पौधे के नमूनों सहित) से उच्च गुणवत्ता वाले जीनोमिक डीएनए को तुरंत शुद्ध करें और प्राप्त करें
③ प्लाज्मिड निष्कर्षण
प्लास्मिड कोशिकाओं में एक प्रकार का गोलाकार छोटा अणु डीएनए है, जो डीएनए पुनर्संयोजन के लिए एक सामान्य वाहक है।प्लास्मिड निष्कर्षण की विधि आरएनए को हटाने, बैक्टीरियल जीनोमिक डीएनए से प्लास्मिड को अलग करने और अपेक्षाकृत शुद्ध प्लास्मिड प्राप्त करने के लिए प्रोटीन और अन्य अशुद्धियों को हटाने के लिए है।
सामान्य प्लास्मिड मिनी किट- परिवर्तन और एंजाइम पाचन जैसे नियमित आणविक जीवविज्ञान प्रयोगों के लिए रूपांतरित बैक्टीरिया से उच्च गुणवत्ता वाले प्लास्मिड डीएनए को तुरंत शुद्ध करें
④ अन्य निष्कर्षण प्रकार, miRNA निष्कर्षण, आदि।
पशु miRNA अलगाव किट- विभिन्न जानवरों के ऊतकों और कोशिकाओं से 20-200nt miRNA, siRNA, snRNA के छोटे आरएनए टुकड़े जल्दी और कुशलता से निकालें।
Ⅳ न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण और शुद्धिकरण परिणाम के लिए आवश्यकताएँs
① न्यूक्लिक एसिड की प्राथमिक संरचना की अखंडता सुनिश्चित करने के लिए।
② प्रोटीन, शर्करा, लिपिड और अन्य मैक्रोमोलेक्यूल्स के हस्तक्षेप को कम करें
③ कोई कार्बनिक विलायक या धातु आयनों की उच्च सांद्रता नहीं होनी चाहिए जो न्यूक्लिक एसिड नमूनों में एंजाइम को रोक सकती है।
④ डीएनए निकालते समय आरएनए और अन्य न्यूक्लिक एसिड संदूषण को समाप्त किया जाना चाहिए, और इसके विपरीत।
पोस्ट करने का समय: नवंबर-24-2022